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一體式超聲波破碎儀對(duì)大腸桿菌實(shí)驗(yàn)的幫助

更新時(shí)間:2021-11-19瀏覽:1643次
   一體式超聲波破碎儀用于多種動(dòng)植物、病毒、細(xì)胞、細(xì)菌及組織的破碎,同時(shí)可用來乳化、分離、勻化、提取、消泡、清晰、納米材料的制備、分散及加速化學(xué)反應(yīng)等。該設(shè)備被廣泛用于生物學(xué)、微生物學(xué)、物理學(xué)、動(dòng)物學(xué)、農(nóng)學(xué)、制藥、化工、污水處理、納米材料等領(lǐng)域,也可用于產(chǎn)生波提取、超聲波材料制備、超聲波萃取、超聲波乳化等。
  破碎大腸桿菌用于提取表達(dá)外源蛋白,在使用一體式超聲波破碎儀之前,用PBS懸浮,然后再破碎效果較好,其作用還是很明顯的,對(duì)其他的一些細(xì)菌同樣起作用,比如鏈霉菌。
  細(xì)菌沉淀直接加樣品1 buffer,再加5μl的巰基乙醇,混勻,離心,煮沸10min,直接上樣,染色脫色步驟:
  將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當(dāng)補(bǔ)點(diǎn)醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來水即可)在微波爐煮10min就可以。在表達(dá)重組蛋白后用超聲波破碎細(xì)胞,采用冰浴,400w,破2s停1s,但是不一會(huì)就產(chǎn)生大量泡沫,影響了破碎功率,pbs和tris緩沖液都是這樣,最后都是破碎不*,而蛋白就在這些未破碎的細(xì)胞中。
  相關(guān)問題探討:
  1.試驗(yàn)中產(chǎn)生氣泡:因?yàn)樘筋^位置沒放好。超聲波破碎儀探頭一定要接近底部約1cm。功率根據(jù)儀器不同會(huì)有所不同,但可通過觀察液面,有波動(dòng)但不要太劇烈就好。
  2.破3s停10s,破碎20-30個(gè)循環(huán)觀察效果。
  3.探頭位置擺放要注意,聽聲音如果不對(duì)的話就要及時(shí)調(diào)整。另外可從菌濃度方面考慮。在使用超聲波破碎時(shí)試著加大體積,振幅最好不要超過60%。
  4.嘗試超8s停8s,對(duì)有些菌體蛋白來說,通常方法很難散熱,導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡,可停頓時(shí)間稍長一些,這種情況多見于包涵體形式的蛋白。如果換用一體式超聲波破碎儀來進(jìn)行工作,由于熱耗較小,停頓周期可適當(dāng)減小。
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